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产品货号 |
产品名称 |
包装规格 |
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BLE025-2A-500U |
PFU DNA聚合酶 |
500U/200ul |
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BLE025-2A-5KU |
5KU/1ml |
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BLE025-2A-20KU |
20KU/4ml |
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BLE025-2A-100KU |
100KU/20ml |
Pfu DNA 聚合酶（Pfu DNA Polymerase）是一种高保真耐高温DNA聚合酶，来源于克隆有Pyrococcus furiosus DNA聚合酶基因的大肠杆菌，该酶同时具有5'-3'聚合酶活性和3'-5'外切核酸酶活性，没有反转录酶活性。因此在聚合反应中可纠正错误掺入的碱基，忠实性极高。Pfu的保真性是TaqDNA聚合酶的10-15倍。体外实验中，在聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）中，使用Pfu聚合酶可以快速，高保真的扩增DNA片段。主要用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。
产品名称
PFU DNA聚合酶（Pfu DNA Polymerase）
酶学编号
/
CAS编号
9012-90-2
来 源
嗜热古细菌（Pyrococcus furiosus）
形 态
溶液（含50％甘油）
酶 活
5U/μl
纯 度
≥95%（SDS-PAGE）
单位定义
1个活性单位（U）是指以合成的发夹型寡核苷酸序列作为模板/引物，在 74℃，6min内，将0.14nmol脱氧核糖核酸聚合成双链DNA中所需的酶量。
用 途
常规PCR；
基因的高保真PCR，克隆和表达；
反转录PCR (RT-PCR)；
双平端PCR克隆；
定点突变。
贮藏条件
温度：-25℃~ -10℃保存 （注：避免温度低于-25℃发生冻结；若长时间冻结会导致活性部分丧失）
有效期：12个月
推荐使用条件
储存缓冲液：20 mmol/L Tris-HCl (pH 8.2), 1 mmol/L DTT, 0.1 mmol/L EDTA, 100 mmol/L KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20, 50% (v/v) 甘油。
10×Pfu Buffer (with Mg2+)：200 mmol/L Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mmol/L (NH4)2SO4, 20 mmol/L MgSO4, 100 mmol/L KCl, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。
注意事项：
1）失活/抑制：酚氯仿抽提可以使Pfu DNA聚合酶失活
2）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Pfu DNA聚合酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
3）Pfu DNA polymerase在扩增DNA片段时的出错率非常低，但其扩增效率也比较低。对于出错率要求不高的情况，例如RT-PCR进行定量或半定量，推荐使用Taq DNA 聚合酶。在扩增2kb以下DNA片段时，Pfu DNA 聚合酶和Taq DNA 聚合酶的扩增效率相近。在准确性要求很高的情况下，须选择Pfu DNA 聚合酶。
4）Pfu DNA 聚合酶有3'至5'的外切酶活性，在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此Pfu DNA 聚合酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。
5）不能使用Taq DNA 聚合酶的PCR Buffer来替代Pfu DNA 聚合酶的PCR Buffer。
