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产品货号 |
产品名称 |
包装规格 |
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BLE014-1B-1KU |
TEV蛋白酶（His标签） |
1KU/200μl |
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BLE014-1B-10KU |
10KU/2ml |
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BLE014-1B-50KU |
50KU/10ml |
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BLE014-1B-100KU |
100KU/20ml |
TEV 蛋白酶(His标签)是一种在大肠杆菌中重组表达的带His标签的来源于烟草蚀纹病毒(TEV)的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的GST、His或者其它标签的蛋白酶。TEV 蛋白酶(His标签)酶切上述七肽序列，标签蛋白被酶切后，在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基，最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。TEV 蛋白酶另一显著优点是在400mM咪唑中仍有较高活力，因此对于很多用镍柱纯化的His标签目的蛋白，可直接将TEV 蛋白酶加入含高浓度咪唑的蛋白溶液中，在4℃透析去除咪唑的同时进行酶切。也可以在透析后再用TEV蛋白酶进行酶切以去除标签。
TEV 蛋白酶(His标签)适用于酶切带有His标签的重组蛋白，因为酶切后没有完全酶切的重组蛋白、切除的His标签以及TEV 蛋白酶 (His标签)都可以结合于镍柱纯化介质上而被除去，穿柱液中则含有所需的靶蛋白。
产品名称
TEV蛋白酶（His标签）
酶学编号
/
CAS编号
/
来 源
烟草蚀纹病毒（TEV）
形 态
溶液（含50％甘油）
酶 活
5U/μl
纯 度
≥95%（SDS-PAGE）
单位定义
1个活性单位（U）是指在30℃，pH 8.0条件下反应1h，能够切割3μg对照底物达85%以上所需的酶量。
用 途
生物工程下游技术中融合蛋白酶切使用的重要工具酶
可用于TEV蛋白酶识别位点的融合蛋白的切割。
贮藏条件
温度：-25℃~ -10℃保存 （注：避免温度低于-25℃发生冻结；若长时间冻结会导致活性部分丧失）
有效期：24个月
推荐酶切条件：
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成分 |
体积 |
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融合蛋白 |
0.1mg |
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TEV蛋白酶 |
20U |
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10x TEV buffer |
10μl |
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H2O |
补加至100μl |
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温度（℃） |
20-37℃ |
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时间（h） |
12~16 |
使用注意事项：
1）TEV 蛋白酶的最佳酶切温度是30℃，在29-34℃范围内均具有较高的酶活性，当温度达到或高于高37℃时，其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃用TEV 蛋白酶切过夜。TEV 蛋白酶在pH6.0-9.0范围内具有活性，而当pH小于或等于5时，会失去酶活性。
2）TEV蛋白酶的活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF、AEBSF、Bestatin、Pepstatin、E-64、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV 蛋白酶的酶活性，因为天然的TEV 蛋白酶含有其维持酶活性所必需的Cys151。
推荐使用条件：
储存缓冲液：25 mmol/L Tris-HCl (pH8.0), 150 mmol/L NaCl, 1 mmol/L EDTA, 5 mmol/L DTT, 50%(v/v)甘油。
10×TEV Buffer：500 mmol/L Tris-HCl (pH8.0), 250 mmol/L NaCl, 5 mmol/L EDTA, 10 mmol/L DTT。
