Biolonase核酸酶，纯度≥60％（编号：BLE001-1C）

推荐使用条件

储存缓冲液：20 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 2 mmol/L MgCl₂, 20 mmol/L NaCl, 50%(v/v)甘油

最适pH：8.0，pH适用范围：6～10，可用50 mmol/L TRIS-HCL或PBS的缓冲体系

最适温度：37℃，温度适用范围：0～42℃

反应时间：（15～37℃）时，反应时间30～60min；（2～8℃）时，反应时间60min以上（温度越低，需要延长反应时间才能达到效果）

辅助因子：向反应体系加入适量MgCL₂，使得Mg²⁺ 达到  2～10mmol/L，促进反应。

用量：Biolonase核酸酶有效工作浓度为10～100u/ml，首次使用建议50u/ml。

用法：建议在悬浮菌体时加入Biolonase核酸酶，尽早加入可增加反应时间，降低核酸效果越好。

典型应用

1.用于除去产品中的DNA/RNA

中国药典2020版三部对Vero细胞培养疫苗要求外源DNA残留不超过100pg·剂量^-1，乙型脑炎灭活疫苗不高于100pg·剂量^-1，冻干人用狂犬病疫苗不高于3ng·剂量^-1，大肠杆菌及酵母表达的治疗类基因工程重组产品，其残余DNA应不超过10ng·剂量^-1，对于CHO细胞表达的重组蛋白制品，DNA残留量不超过100pg·剂量^-1。Biolonase核酸酶可以将核酸水解为3～5个碱基对的寡聚核苷酸碎片，这些片断极易被除去或不被检出（同时也不具有大分子DNA所具有的危害），从而使产品核酸含量符合要求。

2.用于降低细胞破碎后的粘度

Biolonase核酸酶可以水解核酸，降低细胞溶解产物的粘度，从而提高蛋白质的产量、改善离心分离效果、使过滤（尤其是超滤）变得容易、增加层析纯化的效率。

3.用于微粒处理过程中改善微粒的纯化过程

核酸很容易粘附在病毒颗粒、包涵体颗粒等细胞生成颗粒的表面，造成这些颗粒的凝聚，使颗粒大小或电荷发生改变而影响分离。Biolonase核酸酶能有效的避免核酸的对纯化影响、提高产量。

4.用于生化分析中样品的制备

在ELISA、色谱分析、双相电泳和足印分析中，用核酸酶处理含有核酸的样品，可以提高分辨率、提高回收率。

应用举例

例1. 降低大肠肝菌裂解液黏度

取大肠杆菌BL21（DE3）7.5g（湿重）悬浮于15ml缓冲液（10 mmol/L Tris-HCl，1 mmol/L EDTA，pH9.0）。加入MgCl₂使其终浓度为6 mmol/L。分别取5ml大肠杆菌悬浮液，加入核酸酶使其浓度递增。

加入核酸酶后，悬浮液通过高压匀质器（10000psi），然后立即放入0℃下。在不同的时间间隔，用枪头吸入悬浮液，然后滴下，获得“水滴”效果为判定粘度降低标准。以下为不用酶用量，与粘度降低所需时间对比。

例2. 核酸去除

将鲱鱼精子DNA溶于缓冲液（50 mmol/L Tris-HCl，1 mmol/L MgCl₂，0.1mg/ml BSA，pH8.0）中，制备成供试液。供试液在不同温度下（0℃、23℃、37℃）用不同浓度的Biolonase核酸酶处理。在不同的时间间隔，取出10μl（最初含有500ng DNA）转移到硝酸纤维素膜上。以用32P标记的鲱鱼精子DNA为探针，进行斑点杂交。标准DNA量从100ng到10pg，用于核酸残留半定量计算。

不同处理时间后剩余可杂交鲱鱼精DNA量（ng）

Biolonase核酸酶浓度为90U/ml，供试液在不同温育时间下残留DNA量（ng）

Biolonase核酸酶浓度为90U/ml，供试液在不同温育时间下残留DNA量（ng）